De diagnose van acromegalie is vrij eenvoudig (maar alleen als je erover nadenkt), omdat het een bloedtest vereist om het niveau van GH en IGF-1 te bepalen. Bij acromegalie is er een hoog niveau van IGF-1 en GH, wetende dat de afscheiding van GH normaal gesproken intermitterend is, maar dat het bij acromegalie altijd hoog is omdat het niet langer gereguleerd is. De definitieve laboratoriumdiagnose is gebaseerd op de glucosetest. Aangezien glucose normaal gesproken de secretie van GH verlaagt, maakt orale toediening van glucose het mogelijk om door opeenvolgende bloedonderzoeken te detecteren dat, bij acromegalie, de secretie van groeihormoon hoog blijft.

Zodra de hypersecretie van GH is bevestigd, is het noodzakelijk om de oorsprong ervan te vinden. Tegenwoordig is de gouden standaard een MRI van de hersenen die een hypofyse-tumor kan vertonen. In zeer zeldzame gevallen is het een tumor die zich ergens anders bevindt (meestal in de hersenen, longen of pancreas) die een ander hormoon afscheidt dat op de hypofyse inwerkt, GHRH, dat de productie van GH stimuleert. Er wordt dan een uitgebreidere beoordeling uitgevoerd om de oorsprong van deze abnormale afscheiding te vinden.